TurboTEV蛋白酶是一种增强形式的烟草蚀刻病毒（TEV）N1a蛋白催化片段，属于半胱氨酸蛋白酶，能够识别特定的切割位点Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly，并在Gln和Gly之间进行切割。该酶在4°C下表现出强大的活性，具有高特异性和良好的稳定性。此外，TurboTEV蛋白酶的活性不依赖于特殊的缓冲液，能够在最适合目标蛋白的缓冲液中使用。

TurboTEV蛋白酶的分子量为52kDa，并带有GST和His标签，因此可以通过与Ni螯合或谷胱甘肽（GSH）树脂的结合，轻松去除剪切标签。其来源是大肠杆菌，活性超过10 Units/µg，1单位TurboTEV蛋白酶可以在30℃下裂解3µg底物的85%。

操作协议

1. 在溶液中裂解

A. 配制新鲜的冰冷透析缓冲液，示例：25mM Tris-HCl，pH 8.0，150-500mM NaCl，14mM β-巯基乙醇。

B. 稀释目标蛋白样品池：

• (a) 用透析缓冲液将目标蛋白稀释至1-2 mg/mL。如目标蛋白在透析缓冲液中聚集，可选择不进行此步骤。
• (b) 留出一小部分未切割样品用于分析。如样品来自镍柱的洗脱，并且EDTA与目标蛋白兼容，可加入EDTA至最终浓度0.5 mM。

C. 按照1:100（w/w）的比例加入TurboTEV蛋白酶，即100 mg目标蛋白对应10000 Units（1 mg）TurboTEV蛋白酶。

D. 在4℃下透析，用透析缓冲液透析约16小时。

2. 去除TurboTEV蛋白酶

A. 通过充柱处理。

B. 进行SDS-PAGE分析（可选）。

产品应用

• 蛋白裂解功能；
• 从重组蛋白中去除融合标签；
• 蛋白质和肽的纯化。

常见问题

1. 问：TEV消化反应中缓冲液条件的重要性如何？是否有下列任一条件可能会影响TurboTEV的剪切效率？

• (a) 1 mM DTT
• (b) 10%甘油
• (c) 20 mM组氨酸
• (d) 500 mM NaCl
• (e) 100 mM Tris-HCl
• (f) β-巯基乙醇的加入

答：(a) 1 mM的DTT可以；(b) 不推荐10%甘油；(c) 不建议20 mM组氨酸；(d) 不推荐500 mM NaCl；(e) 不推荐100 mM Tris；(f) β-巯基乙醇的功能与DTT类似，可以添加。

2. 问：在剪切之前，需要进行缓冲液交换吗？

答：这可能是必要的。

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