尊龙凯时(中国区)人生就是搏为您提供关于人胃癌细胞MGC803的详细培养指南，以确保您在使用该细胞系进行研究时能够获得最佳结果。

一、细胞培养条件

细胞名称：人胃癌细胞MGC803

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P

传代方法：首次建议以1:2的比例进行传代；每两天更换培养基。建议使用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养；若效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞接收后的处理

收到细胞后，确保培养至良好状态，并用完全培养液灌满细胞瓶并封口，这是运输细胞的最佳方法。使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，之后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，使细胞状态稳定后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍率的照片（建议拍摄40x、100x、200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据，未提供照片将默认细胞状态良好。建议在传代之后，一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自制的完全培养基以进行对比培养，并在换液后将瓶盖稍微松开。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：

若细胞汇合度未超过80%，则将培养液收集至离心管中，保留5ml培养基并放置于37℃、5% CO2培养箱中继续培养；若细胞密度超过80%，则进行传代，具体步骤如下：

1. 丢弃培养上清，用不含钙、镁离子的PBS轻洗细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放在37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞消化情况，若大多数细胞呈现圆形并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后添加5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），添加新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存：

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞形态变化后加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，并转移至15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如需将细胞转移至液氮罐，需在-80℃冰箱中存放至少24小时后再进行转移。

c、细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护工具），快速置入37℃水浴中解冻，直至无结晶形成；然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞可能在运输过程中因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。如脱落严重，可将培养液收集至离心管中，进行1000rpm离心，收集上清进行过渡培养。加入胰酶处理和重悬后，遵循上述传代步骤进行细胞培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题可重发的情况：

1. 在运输过程中出现的细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等情形可重发。
2. 如出现细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰运输的细胞在复苏后24小时，如细胞大多数未存活（需提供真实细胞状态照片），可重发。
4. 干冰发货的细胞在复苏后24小时或常温发货的细胞在静置4小时且未开封后出现污染，也可重发。
5. 如出现细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后可重发。
6. 收到细胞当天以及第2、3天需拍照，3天未告知视为产品合格；如在4-7天内出现问题，需提供前三天的照片和操作步骤，由技术人员判定责任。

2）细胞出现问题不予重发的情况：

1. 客户造成的细胞污染不予重发。
2. 客户的操作不当导致细胞状态不良不予重发。
3. 非本库推荐的培养体系导致的细胞状态问题不予重发。
4. 细胞状态不佳，未提供前三天照片的不予重发。
5. 经其他处理的细胞同样不予重发。
6. 在收到细胞的2天内未告知也不予重发。
7. 其他情况将根据具体情况评估处理。

对您的科研工作提供支持是尊龙凯时(中国区)人生就是搏的使命，希望本指南能够帮助您顺利开展研究。